Avaliação da atividade antirreabsortiva de um derivado de N-acilhidrazona in vitro

Abstract

A osteoporose é uma doença que afeta mais de 200 milhões de pessoas no Brasil e no mundo. É caracterizada pelo desequilíbrio osteoimunológico do processo de reabsorção/formação óssea, resultando em perda da estrutura óssea e fratura dos ossos. A quantidade de fármacos disponíveis para o tratamento da osteoporose é limitado e apresenta efeitos colaterais. Diante disto, a identificação de novos fármacos com menos efeitos adversos e com ação antirreabsortiva mais efetiva torna-se necessária. Estudos prévios do nosso grupo demonstraram uma atividade imunomoduladora promissora do derivado da classe das N-acilhidrazonas, o (E)–N’–(3,4– dimetoxibenzilideno)– 4– metoxi-N-metilbenzohidrazida (LASSBio-1386). O presente estudo tem como objetivo avaliar o efeito do LASSBio-1386 sobre a diferenciação das células ósseas em ensaios in vitro. As células foram obtidas da medula óssea de camundongos C57BL/6, cultivadas em condições estéreis e caracterizadas quanto à morfologia e ao perfil imunofenotípico. Após três passagens em cultura, essas células apresentavam capacidade de adesão ao plástico, proliferação e formato fibroblastóide. As análises por citometria de fluxo revelaram a expressão de moléculas de superfície celular que caracterizam as células-tronco mesenquimais/estromais (CTM) como o CD44, CD73, CD90 e CD105. Em seguida, ensaios de citotoxicidade frente às CTMs foram realizados e o LASSBio-1386 apresentou valor de CC50 igual a 41,62 μM. Após determinar a concentração atóxica, ensaios de diferenciação osteogênica foram realizados. As CTMs foram cultivadas com meio indutor de formação de osteoblastos e tratadas com duas concentrações do composto (15 e 30 μM). Após 21 dias de cultura, as células foram coradas com alizarina vermelha a 2%. Nos grupos tratados com o LASSBio-1386, foi observado, através de visualização por microscópio óptico, que os poços apresentaram maior deposição de cálcio, sugerindo um estímulo à diferenciação osteoblástica. Para além disso, o LASSBio-1386 diminuiu a diferenciação osteoclástica em ensaios in vitro em concentrações não tóxicas para CTM. De acordo com estes dados, sugere-se que o composto LASSBio-1386 apresenta baixa citotoxicidade e possui ação antirreabsortiva, influenciando no equilíbrio entre o processo de reabsorção e formação óssea in vitro.