Aplicação de um ensaio de análise de imagem automatizado para a triagem de moléculas contra amastigotas de Leishmania Amazonensis

Abstract

As leishmanioses são um conjunto de doenças infecciosas causadas por parasitos do gênero Leishmania e transmitida por flebótomos fêmeas. A doença apresenta alta morbidade e mortalidade, sendo de grande importância para a saúde pública. O tratamento com os antimoniais pentavalentes está associado a alta toxicidade e à falha terapêutica. Assim, a descoberta de novos fármacos é extremamente importante para o desenvolvimento do tratamento contra a doença. Diante disso, validamos e aplicamos um ensaio de análise automatizada de imagem na triagem de moléculas com potencial anti-Leishmania. Macrófagos do exsudato peritoneal de camundongos da linhagem BALB/c foram infectados com promastigotas de Leishmania amazonensis em fase estacionária de crescimento. O tratamento com as moléculas em teste foi realizado durante 72 horas, na concentração máxima de 10μM. As células foram fixadas e marcadas com Hoechst33342. Imagens de fluorescência foram adquiridas utilizando o Operetta High Content System. As imagens foram submetidas à um algoritmo de segmentação e quantificação parasitária padronizado. O número de células foi utilizado como parâmetro de toxicidade e a porcentagem da redução de amastigotas como parâmetro da atividade leishmanicida. Moléculas com estrutura N-acil-hidrazona, tiazolidinonas, tiossemicarvazida e derivados halogenados de flavonóides diméricos, foram triadas. Ao todo foram avaliados 109 compostos puros. Setenta e seis por cento das moléculas da classe das tiazolidinonas apresentaram atividade antiparasitária superior a 50%, sendo que dezessete moléculas apresentaram 100% de da atividade leishmanicida, sem toxicidade aos macrófagos. Entretanto o composto mais ativo não foi eficaz no tratamento de camundongos infectados com L. amazonensis. Derivados halogenados de flavonóides diméricos apresentaram atividade anti-Leishmania e seletividade contra o parasito. Moléculas N-acil-hidrazonas e tiossemicarvazida não apresentaram atividade biológica significante. O ensaio automatizado aplicado neste trabalho representa uma ferramenta promissora para a triagem de moléculas com potencial farmacológico contra Leishmania.