Construção de um sistema plasmidial para detecção específica do vírus da dengue em infecção de linhagens celulares

Abstract

A infecção pelo vírus da dengue (DENV) representa um sério desafio para a saúde pública.Nos países tropicais e subtropicais, aproximadamente 3 bilhões de indivíduos estão em situação de vulnerabilidade à infecção pelo DENV. Ainda são necessárias ferramentas para auxiliar para melhor entender a biologia do DENV. Estratégias para a detecção de células infectadas in vitro com o DENV estão disponíveis. Entretanto, há limitações em sua utilização. Portanto, o objetivo deste trabalho é gerar uma construção plasmidial capaz de detectar o vírus da Dengue quando transfectada em células Vero. Para isso, uma construção correspondente a fita inversa e complementar (fita negativa) contento a região 5’ não traduzida, parte da sequência codificante, gene da proteína fluorescente verde e a região 3’ não traduzida foram clonadas no plasmídeo pcDNA3.1 myc/his. Esse plasmídeo foi inserido por transfecção em células Vero. Após o processo de seleção, as células foram infectadas com DENV2 e não apresentaram fluorescência. Há pouco conhecimento sobre a replicação da fita negativa do DENV2, e algum elemento não descrito pode ser necessário para a permitir o funcionamento dessa construção plasmidial. O sistema de seleção por antibiótico também pode ter impactado na produção de proteína e, consequentemente, na construção plasmidial.